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论文摘要

PINK1蛋白在线粒体外膜上的定位机制研究

The Mechanism of PINK1 Localization on the Outer Membrane of Mitochondria

作者:太颢然, 姜长安

Author:TAI Hao-ran, JIANG Chang-an

收稿日期:          年卷(期)页码:2013,44(2):179-183

期刊名称:四川大学学报(医学版)

Journal Name:JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE EDITION)

关键字:帕金森病 PINK1 TOM复合体 双重定位

Key words:

基金项目:

中文摘要

【摘要】 目的研究帕金森氏病相关蛋白PINK1在线粒体外膜上定位的具体机制。方法以体外培养的HEK293T细胞转染表达不同蛋白的真核表达质粒,然后加入DMSO作为对照或者加入线粒体解偶联剂CCCP,以Western印迹和免疫共沉淀技术来检测蛋白的表达和相互作用的变化。结果全长的PINK1在CCCP作用下和线粒体上的Tom40的相互作用能力是DMSO对照的20倍以上,而去掉线粒体定位序列(MTS)和跨膜序列(TM)的PINK1以及其它线粒体外膜蛋白在CCCP作用下没有这样的相互作用。当CCCP去掉后,PINK1全长和Tom40的相互作用迅速减弱。去掉或突变掉TM序列的PINK1和Tom40不论在CCCP是否存在的情况下,均有相互作用。结论在受损线粒体外膜积累的PINK1只是卡在外膜蛋白转运通道上,并没有真正转运到外膜上。而当线粒体的跨膜电位恢复时,它会继续向内转运。

英文摘要

摘要:【摘要】 目的研究帕金森氏病相关蛋白PINK1在线粒体外膜上定位的具体机制。方法以体外培养的HEK293T细胞转染表达不同蛋白的真核表达质粒,然后加入DMSO作为对照或者加入线粒体解偶联剂CCCP,以Western印迹和免疫共沉淀技术来检测蛋白的表达和相互作用的变化。结果全长的PINK1在CCCP作用下和线粒体上的Tom40的相互作用能力是DMSO对照的20倍以上,而去掉线粒体定位序列(MTS)和跨膜序列(TM)的PINK1以及其它线粒体外膜蛋白在CCCP作用下没有这样的相互作用。当CCCP去掉后,PINK1全长和Tom40的相互作用迅速减弱。去掉或突变掉TM序列的PINK1和Tom40不论在CCCP是否存在的情况下,均有相互作用。结论在受损线粒体外膜积累的PINK1只是卡在外膜蛋白转运通道上,并没有真正转运到外膜上。而当线粒体的跨膜电位恢复时,它会继续向内转运。

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