人纤溶酶原K5基因的结构改造及其在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定
Expression,purification and identification of a structure modified human plasminogen kringle 5 gene in Escherichia coli
作者：查晓军;王鹏;李保国;王健琪;翟朝阳;
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收稿日期： 年卷（期）页码：2007,(01):-22-24
期刊名称：华西药学杂志
Journal Name：WEST CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
关键字：人纤溶酶原K5;Kringle5;RGD序列;融合表达;血管增生抑制剂
Key words：
基金项目：
中文摘要
目的改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD-liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD-liteK5蛋白。方法以人纤溶酶原K5 cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD-liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEX1-λT中,构建重组原核融合表达载体pGEX-RGDRGD-liteK5;在IPTG诱导下,观察融合蛋白在大肠杆菌Rosetta中的表达情况;利用亲合层析柱纯化表达产物,用Western blot分析鉴定表达产物。结果PCR扩增得到274 bp的片段,并成功插入pGEX1-λT质粒;含重组质粒的大肠杆菌在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,其分子量为36 kD;获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量约为10 kD的RGDRGD-liteK5蛋白;Western blot证实了表达产物的正确性。结论成功地改造了人纤溶酶原K5基因,构建了重组融合表达质粒pGEX-RGDRGD-liteK5,并纯化了其表达产物。
参考文献
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