天花粉蛋白的制备及其性质
Preparative and partial properties of trichosanthin
作者：杨烨;范翔;李刚锐;李林俐;栗克喜;孟延发;
Author：
收稿日期： 年卷（期）页码：2014,29(05):-510-512
期刊名称：华西药学杂志
Journal Name：WEST CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
关键字：天花粉蛋白;SOD活性;核糖体失活蛋白;两步层析法;栝楼
Key words：
基金项目：
中文摘要
目的采用两步层析法快速制备天花粉蛋白(TCS),并验证其SOD活性。方法粉碎栝楼块茎并抽提,经硫酸铵分级沉淀,再经Blue-Sepharose CL 6B和SP-Sepharose两步层析,可获得TCS纯制剂;采用SDS-PAGE和PAGE鉴定其均一性;用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用;采用PAGE-NBT活性染色法与邻苯三酚自氧化法相结合检测了TCS的SOD活性。结果用两步层析法可获得高纯度和高收率的TCS;经SDS-PAGE和PAGE鉴定,均为单一蛋白质着色带;TCS对Hela细胞增殖具有明显抑制作用,呈时间和浓度依赖关系;TCS不具有SOD活性。结论所用TCS纯化方法简单、快速、收率高,可大量制备具有生物活性的TCS,同时也首次证明了TCS不具有SOD活性。
参考文献
[1]汪猷.天花粉蛋白[M].北京:科学出版社,2000:27-36.
[2]王飞,丁玉,陈明达,等.天花粉蛋白的纯化技术进展及其药理概况[J].安徽农业科学,2010,38(1):29-30,41.
[3]Yeung HW,Poon SP,Ng TB,et al.Isolation and characterization of an immunopressive protein from Trichosanthes kiriowii root tubers[J].Immunopharmacol Immunotoxicol,1987,9:25-46.
[4]孙建忠,季瑞华,王克夷.简便快速分离天花粉毒蛋白的一种方法[J].生物化学杂志,1994,10(6):740-742.
[5]Maraganoreo JM,Joseph M,Bailey MC.Purification and characterization of Trichosanthin[J].Biol Chem,1987,262:11628-11633.
[6]袁惠东,夏其昌,张祖传.用Blue Sepharose CL-6B快速纯化天花粉蛋白[J].生物化学与生物物理进展,1997,24(4):369-373.
[7]Sharma N,Park SW,Vepachedu R,et al.Isolation and characterization of an RIP(Ribosome-Inactivating Protein)-like protein from tobacco with dual enzymatic activity[J].Plant Physiol,2004,134(1):171-181.
[8]杨唐斌,梅尚筠.超氧化物歧化酶活性正,负染色方法的比较[J].生物化学和生物物理进展,1991,18(5):468-469.
[9]李永利,张炎.邻苯三酚自氧化法测定SOD活性[J].中国卫生检验杂志,2000,10(6):673.
[10]汪苗苗,丁玉.天花粉蛋白的盐析工艺和亲和双水相分离工艺[J].中国食品添加剂,2012,01:128-133.
【关闭】
