小鼠IL-18真核表达质粒的构建及其生物学活性的鉴定
Construction of eukaryotic expression vector containing mouse IL-18 and examination of the bioactivity of the expressed IL-18
作者：贾静;李虹;李明远;吕梅励;杨志惠;陈文捷;贾怡;蒋中华;张林;
Author：
收稿日期： 年卷（期）页码：2005,(06):-476-479
期刊名称：华西药学杂志
Journal Name：WEST CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
关键字：白细胞介素18;融合蛋白;真核表达;生物活性
Key words：
基金项目：
中文摘要
目的构建小鼠白细胞介素18(interleukin18,IL-18)的真核表达质粒,并检测其表达的IL-18的生物学活性。方法采用RT-PCR获得小鼠IL-18基因,通过EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及连接反应,构建pEGFP-mIL-18真核表达载体,重组载体经过限制性内切酶、PCR及DNA序列测定等证实连接片段的正确性后,转染HEK293细胞系,荧光显微镜观察GFP-mIL-18融合蛋白的表达,收集转染后72h的上清液,MTT法检测上清液中IL-18表达产物的生物学活性。结果酶切分析、PCR鉴定、DNA测序表明成功地构建了pEGFP-mIL-18真核表达载体,MTT法证明表达产物有刺激小鼠脾细胞增殖的功能。结论所获pEGFP-mIL-18真核表达载体能在体外表达具有生物学活性的IL-18,为进一步研究IL-18的功能和运用奠定了基础。
参考文献
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