含XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1重组菌B-pGp1表达条件的研究

作者：冯蕾,古丽努尔,杨新平

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收稿日期：          年卷（期）页码：2005,15(05):27-

期刊名称：皮革科学与工程

Journal Name：Leather Science and Engineering

关键字：地衣芽孢杆菌,高温中性蛋白酶,克隆,表达,大肠杆菌,

Key words：

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中文摘要

用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增得到了高温中性蛋白酶基因Gp1,将扩增的DNA片段与表达载体pET-28a连接构建成重组分泌型表达载体pGp1。转化大肠杆菌BL21,得到重组大肠杆菌B-pGp1。酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性。SDS-PAGE电泳结果显示具有明显的特异性表达条带,单体融合表达产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。实验证明,重组质粒在宿主BL21中有很好的稳定性,在有选择压力条件下传代60次基本稳定,传代80次重组质粒保留68%以上。摇瓶实验确定了重组菌的最佳表达条件为IPTG 0.75 mmol/L,培养起始pH=6,培养温度为37℃。重组菌所得酶活为2184μ/mL,是受体菌株酶活的11倍。

英文摘要

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